Phylogenetische Charakterisierung des Staupevirus von streunenden Hunden im Kathmandu-Tal

Virology Journal Band 20, Artikelnummer: 117 (2023) Diesen Artikel zitieren

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Staupe ist eine hoch ansteckende, oft tödliche Krankheit, die durch das Staupevirus (CDV) bei Haushunden und wilden Fleischfressern verursacht wird. Das Virus hat Massenepidemien sowohl bei wild lebenden als auch in Gefangenschaft lebenden Fleischfressern mit hohem Schutzwert wie Tigern, Löwen und Leoparden verursacht. Daher ist das Verständnis und die Bewältigung von CDV-Ausbrüchen in Nepal besonders wichtig, wo viele Arten bedrohter wilder Fleischfresser leben, darunter Tiger, Leoparden, Schneeleoparden, Dholes und Wölfe, und wo es auch eine große Population streunender Hunde gibt. Frühere Studien deuten darauf hin, dass CDV eine Bedrohung für wildlebende Fleischfresser darstellen könnte, es liegen jedoch keine Studien zur Charakterisierung der genetischen Stämme des Virus vor, die in Nepals Fleischfressern zirkulieren. Wir haben invasive und nicht-invasive biologische Proben von streunenden Hunden im Kathmandu-Tal gesammelt und die CDV-Stämme in den Hunden mithilfe einer phylogenetischen Analyse genetisch als zur Asia-5-Linie gehörend charakterisiert. Die gleiche Abstammungslinie enthielt auch CDV-Stämme, die von Hunden, Zibetkatzen, Roten Pandas und Löwen in Indien sequenziert wurden. Basierend auf unserer phylogenetischen Analyse halten wir es für wahrscheinlich, dass CDV während des Sylvazyklus bei sympatrischen Fleischfressern erhalten bleibt, was zu wiederkehrenden Übergriffen und Ausbrüchen führt. Es ist von entscheidender Bedeutung, die Übertragung des Virus von Reservoirwirten auf andere Arten zu verhindern, insbesondere auf bedrohte Populationen großer Fleischfresser in Nepal. Daher empfehlen wir für die regelmäßige Überwachung von CDV neben Haushunden auch Wildfleischfresser.

Staupe ist eine hoch ansteckende, oft tödliche Krankheit, die durch das Hundestaupevirus (CDV) verursacht wird. CDV ist ein einzelsträngiges umhülltes RNA-Virus, das zur Gattung Morbillivirus der Familie Paramyxoviridae gehört [1]. Die Krankheit wird durch Aerosole übertragen und verursacht bei infizierten Haushunden (Canis lupus Familiaris) und wilden Fleischfressern charakteristische Atemwegs-, Magen-Darm- und Nervensymptome [1,2,3]. Obwohl CDV oft als Hundekrankheit angesehen wird, wurde es bei fast allen Mitgliedern der Carnivora-Ordnung sowie bei einigen Primaten und Huftieren gemeldet. Wichtig ist, dass CDV bekanntermaßen Massenepidemien bei wildlebenden Fleischfressern mit hohem Schutzwert auslöst. Beispielsweise haben CDV-Ausbrüche zu einem Massensterben afrikanischer Löwen (Panthera leo leo) im Serengeti-Nationalpark und asiatischer Löwen (Panthera leo persica) im Gir-Nationalpark geführt [4,5,6]. In ähnlicher Weise wurde CDV aus verstorbenen Amur-Tigern (Panthera tigris altaica) und Amur-Leoparden (Panthera pardus orientalis) in Ostrussland isoliert [7, 8]. Es wurde auch festgestellt, dass die Krankheit gefangene Tiger und Leoparden in Zoos in den Vereinigten Staaten sowie Nutztiere wie Nerze, Frettchen und Marder in den Vereinigten Staaten und Europa infiziert [9, 10]. In den letzten Jahren haben diese Ausbrüche gezeigt, dass neue CDV-Linien das Wirtsspektrum der Krankheit erweitert haben [11].

Das Verständnis und die Bewältigung von CDV-Ausbrüchen ist in Nepal besonders wichtig, wo viele Arten bedrohter wilder Fleischfresser leben, darunter Tiger, Leoparden, Schneeleoparden (Panthera uncia), Dholes (Cuon alpinus) und Wölfe (Canis lupus chanco). große Population streunender Hunde [12]. Darüber hinaus bestätigte eine kürzlich durchgeführte Seroüberwachungsstudie an Wildkatzen in Nepal die CDV-Exposition bei Tigern und Leoparden, bei denen mehr als ein Drittel der getesteten Großkatzen Symptome aufwiesen und drei kurz nach der Probenahme starben [13]. In ähnlicher Weise haben frühere Studien gezeigt, dass CDV in streunenden Hundepopulationen in ganz Nepal weit verbreitet ist. Zwei unabhängige Umfragen zu streunenden Hundepopulationen rund um den Chitwan-Nationalpark und seine Pufferzonen, die 2017 und 2019 durchgeführt wurden, ergaben eine Seroprävalenz von CDV-Antikörpern von 17 % bzw. 80 % [14, 15]. Im Jahr 2018 wurden in einer ähnlichen Studie in Manang CDV-Antikörper bei 70 % der Hunde identifiziert, während 13 % im RT-PCR-Screening positiv getestet wurden [16]. Da die Hunde und Wildfleischfresser nie gegen CDV geimpft worden waren, deutete das Vorhandensein von CDV-Antikörpern in allen Situationen darauf hin, dass diese Tiere dem Virus ausgesetzt und/oder damit infiziert waren. Darüber hinaus sind diese Vorfälle in oder in der Nähe wichtiger nepalesischer Wildtierregionen aufgetreten, und die Nähe infizierter Hunde und wilder Fleischfresserpopulationen birgt die Möglichkeit einer Krankheitsübertragung.

Obwohl diese früheren Studien darauf hindeuten, dass sowohl Hunde als auch wilde Fleischfresser CDV-Infektionen ausgesetzt waren, wurde die RNA des Virus in keiner Studie genetisch sequenziert. Um den evolutionären Ursprung von CDV in Nepal besser zu verstehen, haben wir CDV bei Ausbrüchen bei streunenden Hunden im Kathmandu-Tal im Jahr 2018 genetisch charakterisiert. Außerdem haben wir auf der Grundlage einer phylogenetischen Analyse verschiedener CDV-Abstammungslinien über den möglicherweise andauernden Sylvazyklus der CDV-Zirkulation unter Fleischfressern spekuliert Wirte durch die Analyse öffentlich zugänglicher Sequenzen von heimischen und wilden CDV-Wirten auf der ganzen Welt.

Wir haben diese Studie durchgeführt, um streunende Hunde im Kathmandu-Tal auf CDV zu untersuchen (Abb. 1). Wir wählten einen dicht besiedelten Ort im Distrikt Bhaktapur, an den im Süden der Gemeindewald Suryabinayak angrenzt (Abb. 1). Der Suryabinayak-Gemeinschaftswald ist ein zusammenhängendes Waldstück am südlichen Rand des Kathmandu-Tals, und in den bewaldeten Hügeln kommen viele wilde Fleischfresser wie Leoparden, Zibetkatzen, Marder und kleine Raubkatzen vor [17].

Der Ort im Zentrum des Distrikts Bhaktapur, wo Hundekotproben zum Nachweis und zur Charakterisierung von CDV-Stämmen bei streunenden Hunden im Kathmandu-Tal gesammelt wurden

Wir haben mit örtlichen Tierkliniken in Kathmandu und Bhaktapur zusammengearbeitet, um Anfang 2018 invasive biologische Proben von streunenden Hunden in unserem Probenahmegebiet zu sammeln (Tabelle S1). Lokale Tierärzte stellten archivierte Proben (Augen-, Speichel-, Kot- oder Rektalabstriche) zur Verfügung, die eingefroren von Straßenhunden mit Verdacht auf CDV-Infektionen gelagert worden waren. Die Hunde zeigten klinische Symptome der Staupe, darunter Konjunktivitis, harte Ballen, Nasen- und Augenausfluss, Krampfanfälle oder Körperzuckungen [z. in 18].

Wir haben auch nicht-invasive Kotproben von streunenden Hunden im Zentrum von Bhaktapur gesammelt (Abb. 1). Wir haben Hundekot in einem dichten Siedlungsgebiet im Zentrum von Bhaktapur beprobt und mithilfe eines geschichteten Probenahmeschemas eine proportionale Anzahl von Proben aus allen Teilen der Region gesammelt. Wir haben zwischen 7 und 9 Uhr frische Hundekotproben in und entlang der Straßen genommen, bevor die Gemeinde die Straßen säuberte. Der Probensammler trug Handschuhe und eine Gesichtsmaske, um eine Kontamination der Probe zu verhindern, und wechselte zwischen jeder Probenahme die Handschuhe. Wir betupften mit einem sterilen Wattestäbchen die äußere Schleimschicht des Kots und schwenkten ihn in einem mit 0,5 ml Trizol-Stabilisator gefüllten Kryoröhrchen. Wir haben die Proben bis zur weiteren Verarbeitung in einem Gefrierschrank bei -80 °C im Labor von Intrepid Nepal gelagert.

Wir haben die Proben (klinische und Stuhlabstriche) gevortext, um die Zellen in der Trizol-Suspension homogen zu verteilen. Wir führten die RNA-Extraktion mit dem Direct-zol RNA MiniPrep Kit (Zymo Research, USA) durch. Wir haben die cDNA-Synthese aus RNA-Eluat mit Invitrogen Superscript III (ThermoFisher, USA) durchgeführt und bis zur Weiterverarbeitung in einem Gefrierschrank bei -80 °C gelagert.

Wir führten ein PCR-Screening auf das CDV-Phosphoprotein (P)-Gen unter Verwendung eines Morbillivirus-spezifischen Primersatzes durch, der die ca. 390 bp große Region des Gens amplifiziert [19]. PCR-Amplikons wurden auf 1,5 %igen Agarosegelen sichtbar gemacht und die amplifizierten Produkte wurden mit dem ExoSAP-IT™-Kit (Thermofisher, USA) gereinigt und die Sequenzierungsreaktionen wurden in einem MJ Research PTC-225 Peltier Thermal Cycler unter Verwendung des ABI PRISM® BigDye durchgeführt ™ Terminator V3.1 Cycle Sequencing Kits (Applied Biosystems, USA) gemäß den Protokollen des Herstellers. Schließlich wurden die Sequenzierungsprodukte auf dem ABI 310 Genetic Analyzer (Applied Biosystems, USA) aufgelöst und die P-Gensequenzen wurden verwendet, um das Vorhandensein von CDV mithilfe eines Blast-Tools anhand der Genbank-Datenbank zu bestätigen.

Nachdem wir das Vorhandensein von CDV in Proben mithilfe des P-Gens bestätigt hatten, amplifizierten wir einen Teil des Hämagglutinin (H)-Gens (ungefähr 852 bp) mithilfe einer Tiled-Amplicon-Methode [20] mit den Primern 3 F/3R und 4 F/4R und sequenzierten ihn zur Variantencharakterisierung in positiven Proben. Das H-Gen kodiert für das virale Oberflächenglykoprotein, das die Bindung zwischen dem Virus und den Wirtszellen vermittelt. Dieses Gen weist eine höhere genetische Variabilität auf als andere Teile des Genoms und wird daher in den meisten Studien als Marker für die Abstammungsklassifizierung von CDV verwendet [21].

Um die Abstammungslinie der CDV-Stämme streunender Hunde in Kathmandu zu charakterisieren, verglichen wir die für unsere Studie gesammelten Probensequenzen mit allen derzeit bekannten CDV-Abstammungslinien. Wir haben einen Datensatz von 245 CDV-H-Gensequenzen voller Länge (im Folgenden als „Referenzsequenzen“ bezeichnet) zusammengestellt, die aus mindestens 26 verschiedenen Ländern auf fünf Kontinenten (außer Australien und der Antarktis) stammen und von 1940 bis 2018 gesammelt wurden (Tabelle S2). Dieser Datensatz umfasst auch Impfstammsequenzen und andere Sequenzen aus 17 verschiedenen geografisch definierten Abstammungslinien von CDV von Wirtsarten der Fleischfresserfamilien Canidae, Felidae, Mustelidae, Ailuridae, Procyonidae und Ursidae, die in der NCBI-GenBank-Datenbank öffentlich verfügbar sind. Wir haben alle Referenzsequenzen zusammen mit den CDV-Sequenzen des Kathmandu-Hundes mit MUSCLE Version 3.8.425 [22] abgeglichen, die Ausrichtung visuell überprüft und die Sequenzen dann bei Bedarf mit AliView Version 1.26 [23] gekürzt und bearbeitet. Für die phylogenetische Baumrekonstruktion haben wir das am besten geeignete Nukleotidsubstitutionsmodell (TVM + G) basierend auf dem Bayes'schen Informationskriterium in jModeltest2 ver2.1.8 [24] aus dem Alignment-Datensatz ausgewählt. Wir führten eine phylogenetische Analyse unter Verwendung dieses Modells und der Bayes'schen Inferenzmethode in MrBayes v3.2.7 [25] mit 2.000.000 Iterationen durch, wobei wir alle 2.000 Iterationen Stichproben machten und die ersten 25 % als Burn-in verwarfen. Wir haben den phylogenetischen Baum mit FigTree v1.4.4 visualisiert und kommentiert [26].

Wir haben klinische Proben von acht symptomatischen Hunden erhalten, die in zwei Tierkliniken in den Distrikten Bhaktapur und Kathmandu aufgenommen wurden. Von den acht Hunden erhielten wir insgesamt 15 Proben zur Untersuchung auf CDV, darunter Augenproben (n = 7), Rektalproben (n = 7) und Speichelproben (n = 1). Sieben der Hunde wurden in einem oder mehreren dieser Probentypen positiv auf CDV getestet, während ein einzelner Hund sowohl in Augen- als auch in Rektalproben negativ getestet wurde. Von den insgesamt fünfzehn entnommenen Proben waren vier Augen- und vier Rektalproben positiv. Wir haben außerdem 44 Kotproben aus den Straßen von Bhaktapur gesammelt, von denen nur drei Proben (6,8 %) mittels P-Gen-PCR-Screening positiv auf CDV getestet wurden (Abb. 1).

Wir haben H-Gen-Teilsequenzen (~ 800 bp) aus fünf CDV-Proben (vier klinische und eine Kotquelle) bestimmt, die aus vier Hunden und einem Hundekot im Kathmandu-Tal isoliert wurden (Tabelle S1). Aufgrund der phylogenetischen Analyse wurden die CDV-Stämme von Hunden im Kathmandu-Tal als Asia-5-Linie klassifiziert (Abb. 2). Diese Linie enthielt auch CDV-Stämme, die von Hunden, Palmzibetkatzen (Paradoxurus hermaphroditus), Roten Pandas (Ailurus fulgens) und Asiatischen Löwen in Indien sequenziert wurden.

Phylogenetischer Baum, der auf der Grundlage der 245 CDV-Hämagglutinin (H)-Gensequenzen aus 27 Ländern und 17 Abstammungslinien erstellt wurde, einschließlich der fünf Proben, die von Hunden (Canis lupus Familiaris) in Nepal gesammelt wurden. Diese Gruppe ist hellrot hervorgehoben. Die phylogenetische Analyse wurde unter Verwendung der Bayes'schen Inferenzmethode in MrBayes mit einem Lauf von 2.000.000 Iterationen, einer Unterprobenahme pro 2.000 Iterationen und der Verwerfung von 25 % der Probe zum Einbrennen durchgeführt. Die Spitzen des Stammbaums sind entsprechend der Familie ihrer Wirtsart/Herkunft gefärbt. Gängige CDV-Impfstoffe wurden rot hervorgehoben, Canidae außer Hunden grün, Hunde blau, Mustelidae lila, Felidae orange und alle übrigen schwarz. A-Posteriori-Wahrscheinlichkeitswerte von Knoten, die durch Bayes'sche Inferenz geschätzt wurden, werden im Baum angezeigt

Wir fanden heraus, dass CDV-Abstammungslinien hauptsächlich nach geografischen Regionen gruppiert waren. Jede Abstammungslinie bestand aus Stämmen, die aus verschiedenen Fleischfresserarten isoliert wurden, die in den jeweiligen geografischen Regionen gleichzeitig vorkommen. Virusstämme, die aus Fleischfressern der Gattungen Canidae und Mustelidae isoliert wurden, kamen in allen Abstammungslinien am häufigsten vor. Die Asia-5-Linie, in der sich unsere Hundeproben aus dem Kathmandu-Tal häuften, ist eine Schwestergruppe der Africa-2-Linie, die aus Stämmen bestand, die von Fleischfressern in der Serengeti-Landschaft isoliert wurden, darunter afrikanische Löwen, Tüpfelhyänen (Crocuta crocuta) und afrikanische Wildhunde (Lycaon pictus). , Löffelhund (Otocyon megalotis), Schakale (Canis aureus) und Haushunde (Abb. 2).

Unsere Studie charakterisierte genetisch CDV-Stämme bei Hunden des Kathmandu-Tals als die Asia-5-Linie, die erstmals 2016 identifiziert und von Bhatt et al. beschrieben wurde. (2019) [2] von Hunden in Indien. Später stellte sich heraus, dass dieselbe Abstammungslinie auch die ursächliche Variante für tödliche Ausbrüche bei asiatischen Löwen im Gir-Nationalpark in Gujarat im Westen Indiens im Jahr 2018 war, die den Tod von fast zwei Dutzend Löwen verursachten [6]. Dieselben Stämme wurden auch anderswo in Indien bei asiatischen Zibetpalmen und Roten Pandas identifiziert [6, 27]. Die Tatsache, dass die bei den Hunden von Kathmandu gefundenen CDV-Stämme dieselben sind wie die bei Fleischfressern in Indien gefundenen, lässt darauf schließen, dass die Asia-5-Variante bei Reservoirwirten in der Region des indischen Subkontinents, insbesondere in Indien und Nepal, weit verbreitet sein könnte. Ähnliche regionale Muster wurden bei anderen CDV-Stämmen in anderen Regionen identifiziert (dargestellt in Abb. 2). Beispielsweise wurde erstmals 1985 festgestellt, dass die Africa-2-Variante für den Tod von über 1.000 afrikanischen Löwen im Serengeti-Nationalpark in Tansania verantwortlich ist [4]. Der gleiche Stamm wurde später bei der Untersuchung des Ausbruchs aus Wildhunden, Tüpfelhyänen und Löffelhunden isoliert und Jahrzehnte später erneut bei afrikanischen Wildhunden und Schakalen nachgewiesen [28]. In ähnlicher Weise wurde die arktische Variante von CDV, die aus verstorbenen Amur-Tigern und Amur-Leoparden in Sibirien isoliert wurde, im Rahmen einer langfristigen CDV-Überwachungsstudie an wilden Fleischfressern in Russland auch unter Marderarten in der gesamten Region gefunden [29].

Diese Studien legen nahe, dass CDV-Stämme, die ähnlich oder eng verwandt sind, regional unter sympatrischen Fleischfresser-Wirten zirkulieren. Dies lässt uns vermuten, dass CDV bei wilden Fleischfressern wie Leoparden und Tigern, die in Nepal vom Virus betroffen sind [13], ebenfalls zur Asia-5-Linie gehören könnte. Laut Bodgener et al. (2023) könnte ein höheres Maß an Raubtierverhalten bei Hunden bei Leoparden als bei Tigern das Ausmaß der damit verbundenen CDV-Exposition bei Leoparden erhöht haben [13]. Es ist jedoch möglich, dass Hunde nicht die einzigen Mitwirkenden sind und in einer komplexeren Reservoirgemeinschaft nur eine untergeordnete Rolle spielen. In Russland wurde entdeckt, dass kleine wilde Fleischfresser wie Marder die wahrscheinlichste Infektionsquelle bei Großkatzen sind. In Tansania wurde außerdem festgestellt, dass Hunde während des Ausbruchs in den Löwenpopulationen nicht die direkte Infektionsquelle waren. Nepal durchläuft derzeit rasante Entwicklungsphasen, und als Folge davon schließen Urbanisierung und anthropogene Eingriffe in die Lebensräume von Wildtieren die Lücken zwischen Wäldern und städtischen Räumen. Es ist bekannt, dass es bei Hunden in wichtigen Wildgebieten wie Manang und Chitwan eine hohe Prävalenz von CDV gibt, und seit Kurzem auch bei Leoparden und Tigern in der Nähe menschlicher Lebensräume. Diese Ergebnisse rechtfertigen zukünftige Untersuchungen, um festzustellen, ob es eine Spillover-Dynamik von CDV bei heimischen und wilden Fleischfressern gibt.

Wie aus unserem phylogenetischen CDV-Baum hervorgeht (Abb. 2), sind in den meisten Abstammungslinien Haushunde der häufigste CDV-Wirt oder das häufigste CDV-Reservoir. Dies ist wahrscheinlich teilweise auf die Tatsache zurückzuführen, dass der Hund am leichtesten zu beobachten/testen ist. Studien deuten darauf hin, dass CDV hauptsächlich in einer Gruppe wilder Fleischfresser vorkommt, möglicherweise in kleinen Fleischfressergilden wie Mardern, Zibetkatzen oder Mungos, die von Natur aus relativ widerstandsfähig sind [29, 30] und sich später durch ihre Interaktionen, die auftreten, auf streunende Hunde überträgt Streunende Hunde greifen die kleinen Fleischfresserarten an oder jagen sie. Dies wird auch in unserem phylogenetischen Stammbaum bestätigt, wo der zweithäufigste Reservoirwirt unter allen Abstammungslinien Marderwürmer waren. Die Arten aus der Familie der Mustelidae in unserem phylogenetischen Datensatz bestanden aus Europäischem Dachs (Meles meles), Frettchen (Mustela putorius furo), Amerikanischem Nerz (Neovison vison), Gelbkehlmarder (Martes flavigula), Steinmarder (Martes foina), Fischer ( Martes pennanti), Europäischer Iltis (Mustela putorius), Zobel (Martes zibellina), Sibirisches Wiesel (Mustela sibirica) und Asiatischer Dachs (Meles leucurus) (Tabelle S2). Diese Marder sind hauptsächlich in Asien, Europa und Nordamerika verbreitet. Eine umfassende Studie von Gilbert et al. (2020) [29] schlugen vor, dass Marderarten in der sibirischen Wildnis das CDV möglicherweise über Sylvationszyklen in Multi-Wirt-Fleischfressergemeinschaften auf lokaler Ebene aufrechterhalten.

In Ländern mit großen Streunerhundepopulationen wie Nepal können Hunde zu CDV-Überträgern werden, da sie häufig mit kleinen Fleischfressern wie Mardern interagieren (angreifen/töten) und dann großen Raubtieren zum Opfer fallen. Diese ökologische Dynamik erhöht die Wahrscheinlichkeit einer CDV-Übertragung und Infektion von kleinen Fleischfressern über streunende Hunde bis hin zu großen Fleischfresserarten oder umgekehrt, die bereits durch eine Vielzahl anthropogener Faktoren bedroht sind (31). Das Kathmandu-Tal ist ein Beispiel dafür, wo die CDV-Spillover-Dynamik möglicherweise aktiv im Gange ist, da die rasche Urbanisierung und der anthropogene Eingriff in die Lebensräume wild lebender Tiere die Lücken zwischen Wäldern und städtischen Räumen schließen. Ein erwachsener männlicher Leopard starb 2021 in der westlichen Randregion von Kathmandu an klinischen Symptomen, die auf eine CDV-Infektion hindeuten [13]. Frühere Studien, die eine CDV-Exposition bei Hunden, Leoparden und Tigern in verschiedenen Teilen Nepals nachgewiesen haben, deuten darauf hin, dass dieser Zyklus in den meisten Regionen des Landes möglicherweise bereits ein andauernder Prozess ist. Daher sind weitere Überwachungsstudien mit molekularer Sequenzierung erforderlich, um das CDV bei mutmaßlich kranken Hunden und wilden Fleischfressern in Nepal zu bestätigen und zu charakterisieren. Neben den Fleischfressern wurden in der Vergangenheit auch Arten wie Huftiere und Affen mit CDV infiziert und sollten ebenfalls überwacht werden [11].

Die meisten Überwachungsbemühungen konzentrierten sich auf Hunde, doch für künftige Überwachungsprogramme ist es wichtig, sie auch auf wildlebende Fleischfresser auszudehnen, darunter Marder, Viverriden sowie große Raubkatzen und Caniden. Auch wenn Hunde keine direkte Rolle im CDV-Reservoir spielen, können die unkontrollierten und wachsenden Populationen streunender Hunde durch Raub, Krankheitsübertragung und andere Maßnahmen eine Bedrohung für die Tierwelt darstellen. Daher ist es von entscheidender Bedeutung, Kastrations- und Impfprogramme für Hunde umzusetzen, um den Herausforderungen beim Artenschutz zu begegnen.

Alle Daten sind im Manuskript enthalten. Die in dieser Studie generierten Nukleotidsequenzen sind in der NCBI Genbank hinterlegt und die Akzessionen sind in der Ergänzungstabelle S1 aufgeführt.

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Referenzen herunterladen

Wir danken dem Department of Livestock Services, dem Department of National Park and Wildlife Conservation und der Gemeinde Bhaktapur für die Erlaubnis, diese Studie durchzuführen. Wir danken Dr. Martin Gilbert für die Unterstützung bei der Labortestentwicklung des CDV-RT-PCR-Nachweises und der Sequenzierung. Wir danken allen Mitarbeitern, Praktikanten und Mitarbeitern von CMDN, Intrepid Nepal und Vet for Your Pet Animal Hospital, die uns in den verschiedenen Phasen des Projekts unterstützt haben.

Die Laborarbeit wurde vom Centre for Molecular Dynamics Nepal und die Feldarbeit vom Vet for Your Pet Animal Hospital unterstützt. Die Forschung erhielt keine externen Mittel.

Zentrum für Molekulardynamik Nepal, Thapathali, Kathmandu, Nepal

Prajwol Manandhar, Rajindra Napit, Saman M. Pradhan, Pragun G. Rajbhandari, Jessie A. Moravek und Dibesh Karmacharya

BIOVAC Nepal, Banepa, Kavre, Nepal

Rajindra Napit, Saman M Pradhan und Dibesh Karmacharya

Tierarzt für Ihr Haustier Tierklinik, Gapali, Bhaktapur, Nepal

Pranav R Joshi

Tierkrankenhaus und Forschungszentrum Kathmandu, Thapathali, Kathmandu, Nepal

Rima D Shrestha

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PM, RN, JAM und DK haben die Studie entworfen. PM, RN, JAM, PRJ und RDS sammelten Proben. RN und SMP führten Laboranalysen durch. PM und PGR führten eine bioinformatische Analyse durch. PM, RN, PGR, JAM und RDS haben erste Entwürfe erstellt und überprüft. Alle Autoren haben das Manuskript kritisch geprüft und fertiggestellt.

Korrespondenz mit Prajwol Manandhar oder Dibesh Karmacharya.

Die Autoren bestätigen, dass die ethischen Standards des Journals, wie auf der Seite mit den Autorenrichtlinien angegeben, während der gesamten Studie eingehalten wurden. Proben von Hunden wurden von privaten Tierkliniken in den Distrikten Kathmandu und Bhaktapur in Nepal entnommen, die die Hunde zur Behandlung vermuteter Krankheiten gebracht hatten, und es wurden keine Hunde speziell für die Studie beschafft. Die Genehmigung zur Sammlung von Hundekotproben in Bhaktapur wurde von den zuständigen Regierungsbehörden und der Gemeinde erteilt.

Unzutreffend.

Die Autoren geben an, dass keine Interessenkonflikte bestehen.

Springer Nature bleibt neutral hinsichtlich der Zuständigkeitsansprüche in veröffentlichten Karten und institutionellen Zugehörigkeiten.

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Nachdrucke und Genehmigungen

Manandhar, P., Napit, R., Pradhan, SM et al. Phylogenetische Charakterisierung des Staupevirus von streunenden Hunden im Kathmandu-Tal. Virol J 20, 117 (2023). https://doi.org/10.1186/s12985-023-02071-6

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Eingegangen: 5. Februar 2023

Angenommen: 14. Mai 2023

Veröffentlicht: 06. Juni 2023

DOI: https://doi.org/10.1186/s12985-023-02071-6

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